Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日渐扩展

从第一次经常出现人体内自身突变到经常出现1改型心血管疾病临床病症的方面率在老年人时期就有很好的详细描述，多个人体内自身突变乙型肝炎的老年人里面有70%在人体内素转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的老年人这一数目增大到84%。相对来说之下，占临床1改型心血管疾病一半以上的改型1改型心血管疾病的复发机制还没有给与应有的分析。

更多的人开始用作应于系统设计来定义1改型心血管疾病的方面：母体在经常出现多种人体内自身突变时进入第1期中，经常出现浓度异常时进入第2期中，经常出现病症时进入第3期中。一些多发人体内自身突变乙型肝炎的母体，在1期和2期，方面速度更慢，并的发展为复发的1改型心血管疾病。我们之前详细描述了一组成员在首次检查到多种人体内自身突变样本后至不算10年无心血管疾病的极更慢方面者，这组成员病变人数不算，但相似性非常明确。随后，我们发现人体内自身特异性特异性CD8+T特异性质反应会在方面平稳的病变里面基本不实际上，但在近期复发和长期以来实际上的心血管疾病病变里面很易于检查到。这显然确实，与方面病变相对来说，这些病变致病反应会的调节增强。

早期分析确实，尽管调节性T特异性质(Treg)生产量短时间，但心血管疾病病变实际上一些基本功能毛病，其里面有数对IL-2的反应会技能减缓。此外，心血管疾病病变里面的现像CD4+T特异性质显然对调节更具抵抗性，观感为现像T特异性质的抑制作用移向，自然产生的Treg和体外产生的可借Treg，以及特异性经历的CD4+T特异性质里面IL-2反应会移向。本分析的目的是详细描述了CD4+调节性T特异性质(Treg)在大群极平稳方面者里面的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以这群人依此的纵向分析，在21岁表列确诊的病变亲属里面检查和1改型心血管疾病的脆弱各种因素。我们之前详细描述了长期以来平稳方面者的相似性，他们保证多重人体内自身突变乙型肝炎最不算10年，但没有经常出现心血管疾病的临床病症，更慢性或非完成性致病。随后，10名一直保证无心血管疾病并愿意缺少大量血液样本的平稳方面者纳入T和B特异性质基本功能分析。在现阶段的分析里面，8名更慢方面者(SP组成员)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的人体内自身突变乙型肝炎。所有的组织者都属于1改型心血管疾病方面的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身突变对某些特异性的橘红色会，然而，一名病变从未属于2期至不算6年，但没有经常出现临床病症，一名病变被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该NADPH完成了单独分析。转化外周血单个核反应特异性质(PBMCs)，采用多参数流式特异性质妖术和T特异性质抑制作用试验分析NADPH里面Treg的频谱、表改型和基本功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)完成无全权负责聚类分析，分析Treg表改型。

结果：与保健NADPH相对来说，来自更慢方面体的知觉CD4+T特异性质的全权负责聚类推断，激活的知觉CD4+ Treg频谱增大，与免疫抑制可借的TNFR相关特异性(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c升高的病变与方面平稳者和匹配的对照组成员相对来说，Treg谱有所不同。基本功能分析确实，与保健NADPH相对来说，来自平稳方面体的Treg介导的CD4+现像T特异性质抑制作用明显受损。观感为对现像CD4+T特异性质CD25和CD134隐含的抑制作用增大。

示意图1 深入的表改型分析推断，CD4+Treg冠状病毒在更慢方面路由表里面增大。由FlowSOM生成的Treg楼内，挤满在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -特异性质上。根据记号物隐含鉴定出10个元簇:知觉T特异性质_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T特异性质;HLA-DR + GITR +知觉T特异性质;文件系统设计Treg_1;文件系统设计Treg_2;文件系统设计Treg_3;和文件系统设计Treg_4。(a)用作9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个链表推选一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在链表组成员远处上色。每个链表里面的饼示意图声称单个记号的隐含级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整体记号隐含。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对金属量为每个metacluster箱新线示意图(金属量> 0.05%)确认为HD和SP组成员:文件系统设计Treg_2 (e),文件系统设计Treg_3 (f),文件系统设计Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T特异性质(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T特异性质(l)。金色圆圈推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用作CITRUS的预测模改型证实，Treg频谱的增大是方面平稳的图标。分级门控(a - f)和甜菜分析(g-k)比较SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T特异性质上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的推选性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含完成转化，模拟FlowSOM小团体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)组成员以及NADPHSP 606(金色)里面CD25+ cd127的频谱汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的箱新线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统设计Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统设计Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统设计Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统设计T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD路由表相互间的不同。(j)箱新线示意图推断了在SP(黑斑)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对金属量(数目)。(k)直方示意图推断每个簇的表改型(黄色)和Treg记号相对隐含与文化背景隐含(金色);上列，文件系统设计Treg_3;下面一行，文件系统设计Treg_4。文化背景与所有其他簇里面记号的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

示意图3 与保健献血者相对来说，方面平稳者知觉treg的GITR增大。每个知觉CD4+T特异性质元簇(知觉T特异性质_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T特异性质;HLA-DR + GITR +知觉T特异性质;文件系统设计Treg_2;文件系统设计Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个隐含记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的隐含热示意图(sp606不有数在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(金色)的FlowSOM GITR隐含串联，推断直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(金色)所有NADPH有数，p< 0.05(金色)NADPHSP 606和匹配的HD不有数在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(金色)串联，推断直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

示意图4 来自平稳方面的CD4+ treg特异性质控制现像CD4+T特异性质的技能减缓。SP组成员用金色的新线和圆圈声称，HD组成员用黑色的新线和圆圈声称，金色的新线/圆圈声称NADPHsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T特异性质完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被记号为CFSE, Treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠重置特异性质，人才3当晚完成流式特异性质妖术检查。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg人才(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑制作用平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用平均值。用作乙型肝炎对照(激活的响应特异性质仅有treg)计算抑制作用平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 现像CD4+T特异性质对平稳方面的T特异性质重置的抑制作用更敏感。SP组成员用金色的新线和圆圈声称，HD组成员用黑色的新线和圆圈声称，金色的新线/圆圈声称NADPHsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T特异性质完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel记号，treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠重置特异性质，人才3当晚完成流式特异性质妖术(CD25反染)和特异性质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同人才。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得出的假设是，来自平稳方面子的重置知觉CD4+Treg在GITR隐含里面给与了扩展和充沛，强调了全面性分析Treg在1改型心血管疾病脆弱性母体里面的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28